استفاده از پروبیوتیک‌ها در واقع تکنولوژي جدید آبزي پروري همگام با محیط زیست به شمار می‌رود. هدف از این تحقیق مطالعه ارزیابی تاثیر پنج نوع پروبیوتیک بر میزان بیان ژن ایمنی Tnfα در ماهی قزل آلای رنگین کمان بود. در این بررسی تعداد 288 ماهی قزل آلای رنگین کمان با میانگین وزن اولیه 50 گرم بصورت کاملا تصادفی به 18 وان اختصاص یافتند و با پنج جیره غذایی شامل شاهد و 4جیره آزمایشی دارای پروبیوتیک‌های مختلف به مدت 8 هفته مورد تغذیه قرار گرفتند در پایان دوره آزمایش از هر وان 2 ماهی به صورت تصادفی انتخاب شد تجاری و بافت طحال و فوق کلیه آن‌ها جدا شد و در مجموع نتایج این پژوهش نشان داد که بیان ژن ایمنی TNFα در بافت فوق کلیه با دو گروه آزمایشی که دارای باکتری‌های Bacillus licheniformis . Bacillus subtilis و Lactobacillus plantarum, Lactobacillus delbrueckii subsp. Bulgaricus, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus rhamnosus, Bifidobacterium bifidum, Streptococcus salivarius subsp. Thermophilus, Enterococcus faecium, Aspergillus oryzae, Candida pintolopesii بودند در مقایسه با گروه شاهد تفاوت معنی داری وجود داشته است در صورتیکه در سایر گروهها با گروه شاهد تفاوت معنی داری مشاهده نشد. و همچنین نتایج نشان داد که بیان ژن TNFα در بافت طحال که با انواع دیگری از پروبیوتیک‌ها تغذیه شده بودند تفاوت معنی داری با گروه شاهد مشاهده نشد. می توانید این پژوهش رشته شیلات را به صورت فایل word دانلود نمایید.
مقدمه
با افزایش روزافزون جمعیت جهان و نیاز به غذا و مواد پروتئینی به ویژه پروتئین حیوانی، آبزیان توانسته‌اند به عنوان یکی ازاقلام غذایی سالم، با ارزش غذایی بالا و ارزان نسبت به سایر مواد غذایی، از جایگاه نسبتا خوبی برخوردار باشند. امروزه پرورش آبزیان، به منظور رهاسازی بچه ماهیان در آبهای طبیعی جهت بازسازی ذخایر و به منظور تولید پروتئین،برای انسان یک صنعت رو به رشد در سراسر دنیا محسوب می‌شود [1]. در سالهاي اخیر آبزي پروري یکی از سریع الرشدترین بخشهاي تولید غذا بوده است، به گونه‌اي که این بخش ازسال با نرخ سالانه 10 درصد رشد نموده در حالی که نرخ رشد سالانه تولید گوشت قرمز برابر 3 درصد و نرخ رشد سالانه صید آبزیان برابر 6/1 درصد بوده است [2]. بخش آبزي پروري در کنار این رشد قابل توجه همواره با مشکلاتی نیز روبرو بوده است که از آن جمله می‌توان به کنترل کیفیت آب، شیوع بیماریها و ... اشاره نمود. به نحوي که شیوع بیماریها به عنوان مشکل عمده آبزي پروري، گسترش اقتصادي این بخش را در بسیاري از کشورهاي جهان تحت تاثیر قرار داده است. در سالهاي اخیر استفاده از پروبیوتیک‌ها به عنوان جایگزینی براي روش‌هاي قبل مطرح گردیده است که به نظر می‌رسد می‌تواند بسیاري از مشکلات را مرتفع سازد. استفاده از پروبیوتیک‌ها به عنوان مکمل غذایی براي حیوانات پرورشی به دهه 1970 برمی‌گردد. اساساً پروبیوتیک‌ها براي افزایش رشد و بهبود سلامتی حیوانات با افزایش مقاومت آن‌ها در برابر بیماري، به غذا اضافه می‌شدند. نتایج بدست آمده از بسیاري از کشورها نشان داده است که بعضی از باکتري‌هاي استفاده شده در پروبیوتیک‌ها (لاکتوباسیلوس‌ها) قادرند محرك دستگاه ایمنی باشند [3].
مصرف بی رویه داروها و مواد شیمیایی علاوه بر ایجاد مقاومت در میکرو ارگانیسم‌ها سبب نفوذ این مواد به خاک و آب گردیده و محیط زیست مجاور مزارع پرورش آبزیان را به شدت آلوده نموده است تثبیت داروها و مواد شیمیایی در بافت‌های ماهی و آبزیان بهداشت انسانی را نیز به خاطر ایجاد حساسیت‌های مختلف، مقاومت باکتریایی و عوارض کلیوی و کبدی به مخاطره می‌اندازد [4].
بیان مسئله
در حال حاضر، استفاده از پروبیوتیک‌ها و سین بیوتیکها به عنوان جایگزین استفاده از آنتی بیوتیکها در پرورش آبزیان مطرح هستند. آبزیان در مراحل اولیه تکثیر و پرورش از سطح ایمنی کافی برخوردار نبوده و نیازمند تدابیر لازم در خصوص پیشگیری و درمان می‌باشند و بهره گیری از پروبیوتیک‌ها نیز می‌تواند به عنوان یکی از ابزارهای موثر در پیشگیری از بیماریها و همچنین محرک رشد مد نظر قرار گیرد. تأثیر پروبیوتیک‌ها در تغذیه، مقاومت در برابر بیماریها و دیگر فعالیت‌های مفید به اثبات رسیده که از جمله اثرات مفیدی که بر سلامتی دارند تأثیر بر روی سیستم ایمنی و تحریک سیستم ایمنی است [6]. به طور كلي پروبيوتيك‌ها از لحاظ نوع سوية ميكروبي مؤثرشان به سه گروه تقسيم مي شوند، پروبيوتيكهای 1- باكتريايي2- قارچي 3- مخمري. پروبيوتيكهاي باكتريايي عمده‌ترين پروبيوتيك‌هايي هستند كه تاكنون در آبزي پروري استفاده شده‌اند.
در خصوص تاثير انواع پروبيوتيك‌ها بر رشد و بازماندگي ماهيان تحقيقات فراواني بعمل آمده است ولي در زمینه اثرات ایمنی زایی آن در ماهیان اطلاعات بسیار محدودی در دسترس می‌باشد. لذا در این مطالعه بررسی ایمنی زایی این ترکیب در ماهی قزل آلای رنگین کمان مدنظر مي باشد.
مشخصات آزاد ماهيان
اكثر آزاد ماهيان گونه‌هايي با ارزش تجاري بالا هستند. هيچ يك از گونه‌هاي اين خانواده كاملاً دريايي نيستند. يعني به صورت آنادرموس در دريا زندگي كرده و جهت تخم ريزي به آب شيرين مهاجرت مي كنند. از مشخصات عمده اين خانواده وجود باله چربي مي‌باشد. اين باله فاقد شعاع است و حد فاصل باله پشتي و دمي است. وجود دندان از مشخصات آزاد ماهيان است و در برخي گونه‌ها دندان‌ها در تمام محفظه دهان گسترش يافته است و وجه تمايز جنس‌هاي نر و ماده در زمان تخم ريزي مي‌باشد. آزاد ماهیان گونه‌هایی گوشتخوار هستند [9].
در گذشته ماهي قزل آلای رنگين كمان را متعلق به جنس سالمو و سلولینوس قلمداد مي‌كردند، در حالي كه ماهي آزاد را مربوط به جنس Oncorhynchus مي‌دانستند. اما در سال 1989 ماهي قزل آلاي رنگين كمان را كه قبلاً تحت عنوان علمي Salmo gairdneri معروف بود، جزو جنس Oncorhynchus طبقه بندي نمودند. امروزه قزل آلاي رنگين كمان با نام علمي O. mykiss معروف است و از لحاظ علمي اين ماهي جزو گونه‌هاي آزاد ماهيان محسوب مي‌گردد [11].
فهرست مطالب
چکیده 1
فصل اول«کلیات»
1-1- مقدمه 3
1-2- بیان مسئله 4
1-3- اهداف تحقیق 5
1-4- فرضیه‌ها یا سؤال‌ها
1-4-1- فرضیه اصلی
1-4-2- فرضيه فرعی
1-5- مشخصات آزاد ماهيان 6
1-5-1- پراكنش ماهي قزل آلا در جهان و ایران 7
1-5-2- بررسی آماری تولیدات پرورشی ماهی قزل آلا 7
1-5-3- دستگاه گوارش و اندام‌های مرتبط 8
1-6- سیستم ایمنی در ماهیان 9
1-6-1- ایمنی غیر اختصاصی 10
1-6-1-1- ایمنی غیر اختصاصی ( ترکیبات مایع) 11
1-6-1-1-1- لیزوزیم 12
1-6-1-1-2- سیستم عامل مکمل (کمپلمان) در ماهیان 12
1-6-1-2- ایمنی غیر اختصاصی (سلولی) 13
1-6-1-2-1- لنفوسیت‌ها 13
1-6-1-2-2- نوتروفیل‌ها 13
1-6-1-2-3- ائوزینوفیل‌ها 14
1-6-1-2-4- مونوسیت‌ها 14
1-6-2- ایمنی اختصاصی 14
1-6-2-1- ایمنی هومورال 15
1-6-2-1-1- ایمونوگلوبولین M 15
1-6-2-2- ایمنی با واسطه سلولی 15
1-7- اهمیت مطالعات خون شناسی در ماهیان 16
1-7-1- شاخصهای خونی 16
1-7-1-1- گلبول‌هاي سفيد (لکوسیت) 17
1-7-1-2- گلبول‌هاي قرمز (اریتروسیت، هموسیت) 17
1-7-1-3- شاخصهای گلبول قرمز یا اندیس‌های خونی 17
1-7-1-4- هماتوكريت 17
1-7-1-5- هموگلوبين 18
1-8- شاخصهای بیوشیمیایی 18
1-8-1- پروتئین کل پلاسما و آلبومین 18
1-8-2- گلوکز 18
1-9- رابطه عوامل محیطی و میکروفلور دستگاه گوارشی 19
1-10- ژن TNFα 20
1-11- نظيم بيان ژن 21
1-11-1- نقش ساختار کروماتین در کنترل بیان ژن 22
1-11-2- تنظیم توسط هیستونها 23
1-11-3- توالی تنظیم کننده مجاور به راه انداز 24
2-11-4- اثر تشدید کننده‌ها بر رونویسی 25
2-11-5- نقش علامت‌های درونزاد در تنظیم بیان ژن 26
1-12- هورمونهای استروئیدی 26
1-13- کمک فعال کننده سازنده و تنظیم رونویسی 27
1-14- تنظیم ژن پس از رونویسی 28
1-14-1- تنظیم ژن در سطح ترجمه 28
1-14-2- mRNA فری تین 29
1-14-3- mRNA گیرنده ترانس فرین 29
1-14-4- کنترل پس از ترجمه 30
1-15- پروبيوتيك چيست؟ 31
1-15-1- ضرورت استفاده از پروبیوتیک‌ها در آبزی پروری 33
1-15-2- فوائد استفاده از پروبیوتیک‌ها (زیست یارها) در جیره غذایی ماهی و میگو 35
1-15-3- خطرات مصرف آنتي بيوتيك‌ها 36
1-15-4- نحوه عمل پروبيوتيك‌ها 36
1-15-4-1- توليد تركيبات ممانعت كننده 36
1-15-4-2- رقابت بر سر مكان‌هاي اتصال 36
1-15-4-3- رقابت جهت جذب و مصرف مواد مغذي 37
1-15-5- معيارها و روشهای انتخاب پروبيوتيك 37
1-15-5-1- جمع آوری اطلاعات زمینهای 38
1-15-5-2- تهیه پروبیوتیک 39
1-15-5-3- ارزيابي توان پروبيوتيك در جهت خارج سازی سویه‌های بیماریزا 39
1-15-6- تركيب و اجزاي فرآورده‌هاي پروبيوتيكي و طبقه بندي پروبيوتيك‌ها 39
1-15-6-1- ارزيابي امکان بيماريزايي پروبيوتيك 41
1-15-6-2- ارزيابي اثر پروبيوتيك بر ميزبان 41
1-15-7- اَشكال و ميزان مصرف پروبيوتيك‌ها 42
1-15-7-1- توليد انبوه، ارزيابي سود اقتصادي 43
فصل دوم«سابقه تحقیق»
2-1- سوابق تحقیق 45
2-1-1- مطالعات داخلی 45
2-1-2- مطالعات خارجی 49
فصل سوم«مواد و روش‌ها»
3-1- موقعیت جغرافیایی محل آزمایش 57
3-2- مدیریت دوره‌ی پرورش 57
3-2-1- آماده سازی سالن پرورش 57
3-3- شرایط محیطی 58
3-3-1- آنالیز جیره‌های آزمایشی 58
3-3-2- خوراک دهی وثبت تلفات 58
3-4- استخراج RNA 62
3-4-1- تعیین غلظت و خلوص RNA 63
3-5- رفع آلودگی احتمالی با DNA ژنومیک 63
3-6- مشاهده قطعات ژنی افزوده شده بر روی ژل 65
فصل چهارم«نتایج»
4-1- نتایج 68
فصل پنجم«بحث و نتیجه‌گیری»
5-1- بحث و نتیجه‌گیری 71
نتیجه‌گیری 75
منابع 78
فهرست جداول
جدول 1-1- گونه‌هايي از ميكرو ارگانيسم‌ها كه ميتوانند به صورت تركيب با مواد غذايي مصرف شوند 40
جدول 3-1- پارامتر‌های فیزیکی وشیمیایی ثبت شده ازآب وان‌های پرورشی 58
جدول 3-2- ترکیب جیره پایه خوراک دردوره پرورش (برحسب درصد ماده خشک) 58
جدول3-3- پرایمرهای مورد استفاده جهت همسانه‌سازی ژن TnfαوElangation 62
جدول 4-1- میانگین TNFα در بافت فوق کلیه برای تیمارهای مختلف در مقایسه با تیمار شاهد 68
جدول4-2- میانگین TNFα در بافت طحال برای تیمارهای مختلف در مقایسه با تیمار شاهد 69
فهرست اشکال
شكل1-1- ماهي قزل آلاي رنگين كمان 9
شکل 1-2- سیستم ایمنی ماهیان 10
شکل 1-3- رابطه عوامل محیطی و میکروفلور دستگاه گوارش 20